Production d’un anticorps monoclonal anti-Dal pour le typage sanguin canin

Abstract

Étant donné l'immunogénicité de l’antigène Dal et sa prévalence élevée (> 98% des chiens sont Dal-positifs), il peut être extrêmement difficile de trouver du sang compatible pour un patient Dal-négatif précédemment transfusé et ayant besoin d’une deuxième transfusion sanguine. De plus, l’accès aux réactifs pour le typage sanguin est actuellement limité, notamment parce qu'il dépend d’anticorps polyclonaux (AcP) produits à la suite de la sensibilisation de trois rares chiens Dal-négatifs identifiés sporadiquement au cours de la dernière décennie dans la colonie d'enseignement de la Faculté de médecine vétérinaire de l'Université de Montréal. Par conséquent, l’objective de cette étude était de produire et de caractériser un anticorps monoclonal murin (AcM) dirigé contre l’antigène canin Dal afin d’assurer la pérennité du typage sanguin Dal. Utilisant la technologie conventionnelle des hybridomes, 5 souris femelles BALB/c ont été immunisées par des injections intrapéritonéales répétées avec des concentrés de globules rouges canines lavés (GRc) Dal-positifs jusqu'à ce que le titrage d’anticorps soit suffisant (> 1 : 10000). Après la fusion de cellules spléniques avec des cellules de myélome, 573 surnageants ont été récoltés à partir du jour 12 post-fusion pour le dépistage avec la technique d'agglutination sur colonne de gel utilisant des GRc Dal-négatif et Dal-positif connus. Parmi 15 surnageants qui ont montré une réaction d’agglutination, un seul avait le patron souhaité (c'est-à-dire anti-Dal). Afin d’évaluer la spécificité et la sensibilité de l’AcM, le typage sanguin Dal de 62 échantillons de GRc a été réalisé en utilisant le AcM anti-Dal et deux AcP canins préalablement caractérisés: 45 échantillons Dal-positifs et 17 Dal-négatifs ont été identifiés avec une concordance de 100 % entre les réactifs (kappa = 1). L’AcM anti-Dal produit a été déterminé comme étant une IgG1.

Given the immunogenicity of the Dal antigen and its high prevalence (>98% of dogs are Dal-positive), it can be extremely difficult to find compatible blood for a previously transfused Dal-negative patient in need of a second blood transfusion. Moreover, access to blood typing reagents is currently limited, in part because it relies on polyclonal antibodies (PAb) produced following the sensitization of three rare Dal-negative dogs identified sporadically over the last decade in the teaching colony of the Faculty of Veterinary Medicine of the University of Montreal. Therefore, the objective of this study was to produce and characterize a murine monoclonal antibody (MAb) directed against the canine Dal antigen, to ensure perennity for Dal blood typing. Using conventional hybridoma technology, 5 BALB/c female mice were immunized by repeated intraperitoneal injections with Dal-positive washed canine red blood cell (cRBC) concentrates until antibody titer was sufficient (>1 : 10000). After fusion of splenic cells with myeloma cells, 573 supernatants were collected starting 12 days post-fusion for screening with the gel column agglutination technique using known Dal-negative and Dal-positive cRBC. Among 15 supernatants that showed an agglutination reaction, only one had the desired pattern (i.e., anti-Dal). To assess the specificity and sensitivity of the MAb, the Dal blood typing of 62 cRBC samples was performed using the anti-Dal MAb and two previously characterized canine PAb: 45 Dal-positive and 17 Dal-negative samples were identified with 100% agreement between reagents (kappa = 1). The anti-Dal MAb produced was determined to be IgG1.