Quantification des lymphocytes, éosinophiles et mucines dans des biopsies duodénales de chevaux exposés à différentes diètes

Abstract

L'alimentation peut jouer un rôle sur le nombre et le type de leucocytes présents dans la muqueuse de l'intestin grêle. Les objectifs de cette étude sont de 1) quantifier et caractériser les lymphocytes et les éosinophiles de la lamina propria ainsi que 2) d'évaluer le type de mucine sur des biopsies duodénales de chevaux soumis à différentes diètes. Une variabilité des cellules et des mucines devrait être observée en fonction de l'alimentation. Sept juments (n = 7) ont d'abord reçu une alimentation riche en fibres pendant six semaines et ensuite, une alimentation riche en protéines pendant six autres semaines. Une biopsie endoscopique duodénale a été effectuée à la fin de chaque période de diète. Une coloration à l’hématoxyline-éosine-phloxine-safran, une immunohistochimie pour quantifier les lymphocytes T (CD3) et B (CD20) ainsi qu’une coloration AB PAS pour étudier les mucines ont été effectuées. Un compte des lymphocytes identifiés à l’hématoxyline-éosine-phloxine-safran, au CD3 et au CD20 ainsi que des éosinophiles identifiés à l’hématoxyline-éosine-phloxine-safran a été fait. Les mucines ont été évaluées qualitativement. Pour 11 des 13 biopsies, le compte de lymphocytes totaux était plus élevé lorsqu'ils étaient identifiés avec l'immunohistochimie que lorsqu'ils étaient identifiés avec l'hématoxyline-éosine-phloxine-safran (p = 0,057). Les juments, lorsqu’elles sont nourries avec une diète riche en protéines, présentent un ratio lymphocytes T/lymphocytes B qui augmente significativement (p = 0,026). Les éosinophiles et les mucines ne sont pas modifiés par ces deux diètes. Pour conclure, l’immunohistochimie est nécessaire pour démontrer l'impact de l’alimentation sur le ratio lymphocytes T/lymphocytes B de la lamina propria des biopsies duodénales de juments saines. De futures études pourront se servir de ces notions pour évaluer les facteurs de variation des leucocytes duodénaux dans le but d’établir des valeurs de références de ces cellules pour la muqueuse intestinale normale.

Diet may play a role on the number and type of small intestinal mucosal leucocytes. The objectives of this study are 1) to quantify lymphocytes and eosinophils of the lamina propria and, 2) to evaluate the type of mucins present in duodenal biopsies from horses fed different diets. A variability in leukocytes and mucins should be observed with the diet change. Seven mares (n = 7) were fed for six weeks a diet rich in fibers followed by another six weeks of a diet rich in proteins. One endoscopic duodenal biopsy per horse was taken at the end of each period of diet. An hematoxylin-eosin-phloxin-saffron stain, an immunochemistry to evaluate T lymphocytes (CD3) and B lymphocytes (CD20) and an AB PAS stain to evaluate mucins were performed. A quantification of lymphocytes identified by hematoxylin-eosin-phloxin-saffron, CD3 and CD20 and of eosinophils by hematoxylin-eosin-phloxin-saffron was performed. Mucins were qualitatively evaluated. For 11/13 biopsies the lymphocyte count was higher when identified with immunochemistry than identified by hematoxylin-eosin-phloxin-saffron stain. Mares, when fed a protein rich diet, have a significantly higher ratio of lymphocytes T/lymphocytes B (p = 0,026). No differences were found for eosinophils and mucins with the diet change. These results indicate that immunochemistry is necessary to identify the impact of the diet on the lymphocytes T/lymphocytes B ratio of the lamina propria in duodenal biopsies from healthy mares. The results from this study can be used to evaluate factors contributing to duodenal leukocytes variation to establish reference values for the range of the number of leukocytes found in the normal equine intestinal mucosa.