Les chambres de leucoréduction sont une nouvelle source de cellules pour la génération de lignées de lymphocytes T en immunothérapie

Abstract

La réactivation de virus latents est une cause importante de morbidité et mortalité chez les patients immunocompromis. Le transfert adoptif de lymphocytes T pathogène spécifiques est une stratégie prometteuse pour le traitement de ces complications. Un problème important dans le développement de nouveaux protocoles de thérapie cellulaire est la source limitée de cellules. Afin de pallier cette limitation, nous avons évalué, en collaboration avec Héma-Québec, le potentiel des PBMC provenant de chambres de leucoréduction (LRSC) pour générer des lignées de lymphocytes T pour la thérapie cellulaire. Les LRSC sont habituellement utilisées par les agences de sang pour « leucodéplèter » les dons de plaquettes et celles-ci sont ensuite considérées comme des déchets. Pour évaluer leur potentiel, nous avons comparé des PBMC contenus dans des LRSC ou le sang périphérique provenant d’un même donneur sain, prélevé au même moment. Les PBMC provenant des LRSC contiennent les mêmes proportions des principales populations mononucléaires que ceux contenus dans le sang périphérique pour chacun des donneurs. Toutefois, les LRSC semblent induire le clivage du marqueur de différenciation CD62L, dont l’expression est rétablie après leur culture. Suite à une stimulation polyclonale, les PBMC des LRSC et ceux du sang périphérique ont une expansion, une différenciation et démontrent un potentiel de polyfonctionnalité similaires. La prolifération, le phénotype et la réactivité des lignées virus spécifiques générées à partir d’un répertoire mémoire étaient similaires selon qu’elles proviennent des LRSC ou du sang périphérique. À partir des LRSC, nous avons généré des lignées pathogène spécifiques fonctionnelles à partir d’un répertoire naïf. Finalement, l’ensemble des résultats démontrent que les LRSC sont une nouvelle source de PBMC de qualité. Le repositionnement des LRSC permettrait de valoriser un déchet. La quantité de cellules contenue par les LRSC et la possibilité d’utiliser une série de donneurs de plaquettes réguliers pourraient permettre la création d’une banque de lymphocytes T pathogènes spécifiques pour usage immédiat en immunothérapie adoptive.

Opportunistic reactivation of latent viruses are a significant cause of morbidity and mortality in immunocompromised patients. The transfer of ex vivo expanded pathogen T-cell lines is an attractive safe and effective strategy to treat virus related complications. The source of T cells can be either from peripheral blood or leukapheresis products of healthy donors. We evaluated the potential of PBMC from leukoreduction system chambers (LRSC) to generate therapeutic T cell products. Blood agencies usually discard LRSC that are used to leukodeplete plateletpheresis blood products which may be used as a source of T cells for manufacturing clinical scale T-cell products. The LRSCs reflect the composition of the peripheral blood except for a transient downregulation of CD62L expression in freshly extracted PBMCs from LRSCs. Non-specific stimulation revealed that LRSC or blood T cells were equivalent in terms of expansion, differentiation and function. Pathogen-specific T-cell lines from memory repertoires harvested from LRSCs and peripheral blood have equivalent proliferation, phenotype and reactivity. Moreover, PBMCs from LRSC can be used to prime and expand virus-specific T cells from seronegative donors. The large number of cells contained in LRSC and the possibility to use serial LRSC from regular platelet donors allows to create a T-cell bank ready to use.