Amino acid substitutions in σ1 and μ1 outer capsid proteins are selected during mammalian reovirus adaptation to Vero cells

Abstract

Establishment of viral persistence in cell culture has previously led to the selection of mammalian reovirus mutants, although very few of those have been characterized in details. In the present study, reovirus was adapted to Vero cells that, in contrast to classically-used L929 cells, are inefficient in supporting the early steps of reovirus uncoating and are also unable to produce interferon as an antiviral response once infection occurs. The Vero cell-adapted reovirus exhibits amino acids substitutions in both the σ1 and μ1 proteins. This contrasts with uncoating mutants from persistently-infected L929 cells, and various other cell types, that generally harbor amino acids substitutions in the σ3 outer capsid protein. The Vero cell-adapted virus remained sensitive to an inhibitor of lysosomal proteases; furthermore, in the absence of selective pressure for its maintenance, t he virus has partially lost its ability to resist interferon. The positions of the amino acids substitutions on the known protein structures suggest an effect on binding of the viral σ1 protein to the cell surface and on μ1 disassembly from the outer capsid.

L'établissement de la persistance virale en culture cellulaire a précédemment mené à la sélection de mutants de réovirus, bien que peu d'entre eux aient été caractérisés en détail. Dans la présence étude, le réovirus a été adapté aux cellules Vero qui, contrairement aux cellules L929 classiquement utilisées, sont peu efficaces pour les étapes précoces de décapsidation de réovirus et sont également incapables de produire de l'interféron comme réponse antivirale, lorsqu'infectées. Le réovirus adapté aux cellules Vero porte des substitutions d'acides aminés à la fois dans les protéines σ1 et μ1. Ceci contraste avec les mutants de décapsidation des cellules L929 infectées de manière persistante, aussi bien que chez divers autres types de cellules, qui présentent généralement des substitutions d'acides aminés au niveau de la protéine de capside externe σ3. Le virus adapté aux cellules Vero demeure sensible à un inhibiteur de protéases lysosomales; de plus, en absence de pression de sélection, le virus a perdu en partie sa capacité à résister à l'interféron. La position des différentes substitutions d'acides aminés sur la structure connue de la protéine suggère un effet sur la fixation de la protéine virale σ1 à la surface cellulaire et sur l'élimination de la protéine μ1 de la capside externe du virus.