Les vésicules apoptotiques de type exosome transfèrent de l'ARNm bioactif aux cellules endothéliales par macropinocytose dépendante de la phosphatidylsérine
dc.contributor.advisor | Hébert, Marie-Josée | |
dc.contributor.advisor | Dieudé, Mélanie | |
dc.contributor.author | Brodeur, Alexandre | |
dc.date.accessioned | 2023-08-03T20:08:06Z | |
dc.date.available | MONTHS_WITHHELD:6 | fr |
dc.date.available | 2023-08-03T20:08:06Z | |
dc.date.issued | 2023-06-06 | |
dc.date.submitted | 2022-11 | |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/1866/28520 | |
dc.subject | Apoptose | fr |
dc.subject | Exosome | fr |
dc.subject | Vésicules extracellulaires | fr |
dc.subject | ApoExo | fr |
dc.subject | Cellules endothéliales | fr |
dc.subject | Macropinocytose | fr |
dc.subject | Rétroactivation | fr |
dc.subject | Transfert de cargo | fr |
dc.subject | ARNm | fr |
dc.subject | PCSK5 | fr |
dc.subject | Apoptosis | fr |
dc.subject | Extracellular Vesicles | fr |
dc.subject | Exosomes | fr |
dc.subject | Endothelial Cells | fr |
dc.subject | Macropinocytosis | fr |
dc.subject | Positive Feedback Loop | fr |
dc.subject | Cargo Transfer | fr |
dc.subject.other | Molecular biology / Biologie moléculaire (UMI : 0307) | fr |
dc.title | Les vésicules apoptotiques de type exosome transfèrent de l'ARNm bioactif aux cellules endothéliales par macropinocytose dépendante de la phosphatidylsérine | fr |
dc.type | Thèse ou mémoire / Thesis or Dissertation | |
etd.degree.discipline | Biologie moléculaire | fr |
etd.degree.grantor | Université de Montréal | fr |
etd.degree.level | Maîtrise / Master's | fr |
etd.degree.name | M. Sc. | fr |
dcterms.abstract | L’ischémie-reperfusion inhérente à toute transplantation d’organe solide induit l’apoptose des cellules endothéliales. Les cellules endothéliales apoptotiques sécrètent des vésicules extracellulaires apoptotiques de type exosome (ApoExo). L’internalisation des ApoExo par les cellules endothéliales (CE) adjacentes conduit à des changements fonctionnels importants dont le dysfonctionnement endothélial. Cependant, les mécanismes d’internalisation des ApoExo par les CE sont méconnus. Des marqueurs fluorescents spécifiques aux protéines et à l’ARN ont été utilisés afin de marquer spécifiquement les ApoExo et étudier leur internalisation par microscopie confocale et cytométrie de flux. Les ApoExo ont été internalisés par les CE en fonction du temps et de la concentration. L’inhibition des voies classiques d’endocytose à l’aide d’inhibiteurs pharmacologiques et d’interférence par ARN n’a pas réduit les niveaux d’internalisation des ApoExo. Le blocage de la phosphatidylsérine des ApoExo avec l’annexine-V a réduit leur internalisation. L’analyse ultrastructurelle par microscopie électronique des CE a révélé la présence de structures lamellipodes importantes pour la macropinocytose dont l’inhibition a diminué le transfert d’ARN et de protéines dans les CE. L’analyse par RT-qPCR a révélé que l’ARNm PCSK5, le plus enrichi dans les ApoExo, est augmenté dans les CE traitées aux ApoExo. Cette augmentation est abolie avec ApoExo exempts d’ARNm PCSK5. Ces résultats démontrent que les ApoExo sont activement internalisés par macropinocytose dépendante de la phosphatidylsérine, favorisant leur internalisation en augmentant l’activité macropinocytique des CE. Les ApoExo transfèrent ainsi des ARN fonctionnels capables de moduler le protéome des CE. Ces résultats ouvrent de nouvelles portes pour la prévention de l’internalisation des ApoExo, et donc de la dysfonction endothéliale. | fr |
dcterms.abstract | Ischemia-reperfusion injury inherent to solid organ transplantation induces endothelial apoptosis, releasing apoptotic exosome-like vesicles (ApoExo) which in turn induce endothelial dysfunction. We showed that ApoExo modulates gene expression, functions, and morphology of endothelial cells (EC) towards endothelial dysfunction. However, the mechanism by which EC internalize ApoExo remains unclear. Fluorescent probes specifically targeting proteins and RNA were used to track ApoExo uptake in EC by flow cytometry and confocal microscopy. Pharmacological inhibitors and gene silencing were used to probe uptake mechanisms. RNA and protein expression were quantified using Taqman RT-qPCR and immunoblot, respectively. Uptake of ApoExo by EC was observed in a time- and concentration-dependent manner. Inhibition of clathrin- and caveolae-dependent endocytosis did not decrease ApoExo internalization by EC. Blocking phosphatidylserine on ApoExo surface with annexin-V decreased ApoExo uptake. Ultrastructural analysis of serum-starved EC via electron microscopy revealed lamellipodia-like structures, hallmark of macropinocytosis, whose number increased following ApoExo exposure. Inhibition of macropinocytosis abrogated both RNA and protein transfers from ApoExo to EC. The most enriched mRNA in ApoExo, coding for PCSK5, showed enhanced levels in ApoExo-treated EC along with increased PCSK5 protein levels. This was abrogated by both macropinocytosis inhibition and depletion of PCSK5 mRNA in ApoExo. These results demonstrate that EC actively internalize ApoExo through phosphatidylserine-dependent macropinocytosis, and moreover, that ApoExo further increase macropinocytosis. These findings also show that functional RNAs can be delivered to EC through ApoExo. These results open new avenues for preventing ApoExo internalization and counteracting the development of endothelial dysfunction. | fr |
dcterms.description | Cotutelle - Mélanie Dieudé | fr |
dcterms.language | fra | fr |
UdeM.ORCIDAuteurThese | 0000-0002-7102-2245 | fr |
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