Impact de SRP72 sur le facteur de transcription ETV6 dans la leucémie aiguë lymphoblastique

Abstract

La leucémie aiguë lymphoblastique (LAL) est le cancer pédiatrique le plus répandu et demeure une cause importante de décès infantiles. Les mécanismes d’initiation de cette maladie génétique complexe restent toutefois à éclaircir. Chez 25 % des patients LAL, le gène ETV6 est inactivé à la suite de la translocation t(12;21) et à la délétion subséquente de l’allèle résiduel. La perte de fonction d’ETV6 pourrait donc être un événement à l’origine de la maladie. ETV6 est un répresseur transcriptionnel impliqué dans l’hématopoïèse et exprimé de façon ubiquitaire. Son action est dépendante de plusieurs gènes, mais peu d’entre eux sont connus. Par le biais d’un criblage shRNA à haut débit, nous avons identifié plusieurs modulateurs d’ETV6, particulièrement SRP72. Cette protéine joue un rôle dans la traduction via le complexe SRP qui est responsable de la translocation des peptides nouvellement formés du cytoplasme vers le réticulum endoplasmique. Parallèlement, SRP72 serait également impliqué dans la transcription par sa liaison à la chromatine. De plus, la protéine SRP9, un autre membre du complexe SRP, et le corépresseur CBX3, modulant ETV6 de façon analogue à SRP72, ont été identifiés comme étant liés à ETV6 en spectrométrie de masse. Les points communs de ces protéines avec SRP72 suggèrent une interaction physique potentielle entre ces trois modulateurs et ETV6. Cette étude vise à caractériser l’impact de SRP72 sur la modulation d’ETV6. Premièrement, nous avons montré que l’inhibition du complexe SRP n’affectait pas la répression transcriptionnelle par ETV6 suggérant que l’effet de SRP72 est indépendant de la traduction. Ensuite, nous avons étudié la liaison de SRP72 avec le complexe transcriptionnel ETV6 par co-immunoprécipitation. Les résultats suggèrent une absence d’interaction physique entre les modulateurs potentiels et ETV6 proposant que l’action de SRP72 se fasse plutôt au niveau de la chromatine et impacte la liaison à l’ADN d’ETV6. D’autre part, nous avons montré que l’activité d’ETV6 reste inchangée en l’absence de SRP9 soutenant que la modulation d’ETV6 est indépendante du complexe SRP. L’identification de partenaires transcriptionnels d’ETV6 et la caractérisation de leur impact fonctionnel permettront d’approfondir nos connaissances sur l’origine et la progression de la LLA.

Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is the most common pediatric cancer and is an important cause of childhood mortality. ALL is a complex genetic disease whose causes remain unclear. In 25% of ALL patients, the ETV6 gene is inactivated due to t(12;21) translocation followed by deletion of the residual allele. Thus, ETV6 loss of function might be a constitutive event in ALL development. ETV6 is a transcriptional repressor implicated in hematopoiesis and ubiquitously expressed. Its activity depends on several genes but only a few of them are known. We used a high throughput shRNA screen to identify potential ETV6 modulators including SRP72. This protein plays a role in translation through the SRP complex, which is implicated in peptides translocation from cytoplasm to endoplasmic reticulum. Additionally, SRP72 is potentially implicated in the transcription through its chromatin binding property. Moreover, SRP9, another member of the SRP complex, and CBX3, which modulate ETV6 in a similar way to SRP72, have been shown by mass spectrometry to bind ETV6. The similarities between these two proteins and SRP72 suggest a physical interaction between these three modulators and ETV6. The aim of this study is to characterize the impact of SRP72 on ETV6 modulation. First, we showed that inhibition of the SRP complex doesn’t affect transcriptional repression by ETV6 suggesting that SRP72 impacts independent from the translation pathway. Then, we investigated SRP72 binding with the ETV6 transcriptional complex using co-immunoprecipitation assays. The results suggest that there is no physical interaction between the potential modulators and ETV6, supporting that SRP72 may rather have a role on chromatin and impacts ETV6 DNA binding. Moreover, ETV6 activity remains unchanged after SRP9 silencing confirming that ETV6 modulation is independent from the SRP complex. The identification of new transcriptional partners of ETV6 and the characterization of their functional impact will shed light on the origin of ALL and its progression.